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표제지

목차

국문요약 14

제1장 전체 서론 19

1. GnIH의 구조 및 기능 20

2. 발달 단계와 GnIH 21

3. 번식 활성과 GnIH 22

4. GnIH의 작용경로 23

5. GnIH를 조절하는 외부요인 25

제2장 나일 틸라피아 GnIH 유전자 동정 및 조직별 발현 28

1. 서론 28

2. 재료 및 방법 30

1) 틸라피아 GnIH 유전자 동정 30

2) 조직별 유전자 발현 조사 37

3. 결과 40

1) GnIH 유전자 동정 40

2) 조직별 GnIH 유전자 발현 양상 40

4. 고찰 46

제3장 틸라피아의 초기 개체발달에 따른 GnIH 유전자 발현 변화 48

1. 서론 48

2. 재료 및 방법 50

1) 실험어 및 뇌 적출 50

2) 개체발달에 따른 GnIH, GnRH1, LH-β 및 FSH-β mRNA 발현량 조사 50

3) 통계처리 51

3. 결과 54

1) 개체발달에 따른 GnIH와 GnRH1 mRNA 발현 양상 54

2) 개체발달에 따른 LH-β와 FSH-β mRNA 발현 양상 54

4. 고찰 57

제4장 틸라피아 번식에 미치는 GnIH의 영향 및 비전형 작용경로 60

1. 서론 60

2. 재료 및 방법 63

1) 번식 활성별 GnIH 유전자 발현 차이 63

2) 합성 GnIH 투여가 번식관련 인자에 미치는 영향(in vivo study) 63

3) 합성 GnIH 투여가 뇌하수체의 GTH 유전자 발현에 미치는 영향(in vitro study) 68

4) 통계처리 69

3. 결과 70

1) 번식 활성별 GnIH 유전자 발현 차이 70

2) 합성 GnIH 투여가 번식관련 인자에 미치는 영향(in vivo study) 72

3) 합성 GnIH 투여가 뇌하수체의 GTH 유전자 발현에 미치는 영향(in vitro study) 86

4. 고찰 89

제5장 사육수온이 GnIH 유전자 발현 및 성 스테로이드 농도에 미치는 영향 92

1. 서론 92

2. 재료 및 방법 94

1) 실험어 94

2) 단기 사육수온 변화 94

3) 장기 사육수온 변화 94

4) 사육수온 변화 후 GnIH와 GnRH1 mRNA 발현량 조사 95

5) 사육수온 변화 후 혈장 내 E₂ 및 11-KT 농도 95

6) 통계처리 95

3. 결과 96

1) 단기 사육수온 변화 후 GnIH와 GnRH1 mRNA 발현 96

2) 장기 사육수온 변화 후 GnIH와 GnRH1 mRNA 발현 96

3) 장기 사육수온 변화 후 혈장 내 E₂ 및 11-KT 농도 99

4. 고찰 101

제6장 광정보 전달 호르몬(melatonin)이 GnIH mRNA 발현에 미치는 영향 104

1. 서론 104

2. 재료 및 방법 107

1) 실험어 107

2) 생체 멜라토닌 일주기별 GnIH mRNA 발현량 107

3) 외인성 멜라토닌 처리 후 GnIH mRNA 발현 변화 109

4) 멜라토닌 처리 후 혈장 내 E₂ 및 11-KT 농도 조사 109

5) 통계처리 110

3. 결과 111

1) 생체 멜라토닌 일주기와 GnIH mRNA 발현의 관계 111

2) 외인성 멜라토닌 처리 후 Mel1c-r, GnIH, GnRH1, FSH-β와 LH-β mRNA 발현 변화 111

3) 멜라토닌 처리 후 혈장 내 E₂ 및 11-KT 농도 조사 111

4. 고찰 117

제7장 종합 고찰 120

참고 문헌 123

ABSTRACT 149

표목차

Table 1. Reagents for reverse transcription 32

Table 2. Degenerate primer sets for GnIH gene cloning 35

Table 3. Conditions of degenerate PCR for tilapia GnIH genes 36

Table 4. Reagents used for GnIH degenerate PCR 36

Table 5. Primer sets for 2nd PCR of GnIH gene cloning(이미지참조) 36

Table 6. Primer sets used for qRT-PCR in tissue distribution 39

Table 7. The number of samples and fish pooled in a sample at each weeks 52

Table 8. Primer sets used for qRT-PCR in experiment on effects of GnIH gene on onset of... 52

Table 9. Size of tilapia used for GnIH gene expression at different reproductive status 66

Table 10. Size of tilapia used for effect of GnIH peptide at different reproductive status 66

Table 11. Results of two-way ANOVA evaluating between different concentration of GnIH... 78

Table 12. Sequences of melatonin 1c receptor primer set used for qRT-PCR 108

그림목차

Fig. 1. Route of GnIH action in fish.. 24

Fig. 2. Flowchart for the studies on a role of GnIH in the reproductive system of Nile tilapia. 27

Fig. 3. Potential tilapia GnIH gene products from degenerate PCR (M : marker; 1 : Primers are... 41

Fig. 4. Nucleotide sequences of GnIH partial cDNA (gray shade) in full sequence of GnIH... 41

Fig. 5. The nucleotide sequence and the deduced amino acid sequence of GnIH obtained from... 42

Fig. 6. Alignment of GnIH amino acid sequences from different fish. The putative fish RFamide... 43

Fig. 7. Phylogenic tree of GnIH mRNA. Nucleotide sequences of Nile tilapia (O. niloticus) GnIH... 44

Fig. 8. Relative expression of GnIH gene in various tissues (B: brain, E: eye, Gi: gill, H: heart,... 45

Fig. 9. Change of fish body weight from hatching to 24 weeks post hatch of fish sampled to... 53

Fig. 10. Expression profile of GnIH (A), GnRH1 (B) mRNA in Nile tilapia from hatching to 24... 55

Fig. 11. Expression profile of LHβ (A), FSHβ (B) mRNAs in Nile tilapia from hatching to 24... 56

Fig. 12. Expression of GnIH, LH-β and FSH-β genes in the brain of Nile tilapia at different... 71

Fig. 13. Effect of GnIH peptide (GnIH-10 : 10 ㎍/㎏ BW, GnIH-100 : 100 ㎍/㎏ BW) delivered... 74

Fig. 14. Effect of GnIH peptide (GnIH-10 : 10 ㎍/㎏ BW, GnIH-100 : 100 ㎍/㎏ BW) delivered... 75

Fig. 15. Effect of GnIH peptide (GnIH-10 : 10 ㎍/㎏ BW, GnIH-100 : 100 ㎍/㎏ BW) delivered... 76

Fig. 16. Effect of GnIH peptide (GnIH-10 : 10 ㎍/㎏ BW, GnIH-100 : 100 ㎍/㎏ BW) delivered... 77

Fig. 17. Plasma levels of E₂ (A) and 11-KT (B) in female and male Nile tilapia injected with... 79

Fig. 18. Histological status of gonad and gonadosomatic index (GSI) of pubertal Nile tilapia... 81

Fig. 19. Histological status of gonad and gonadosomatic index (GSI) of first breeding male Nile... 82

Fig. 20. Histological status of gonad and gonadosomatic index (GSI) of first breeding female... 83

Fig. 21. Histological status of gonad and gonadosomatic index (GSI) of experienced male Nile... 84

Fig. 22. Histological status of gonad and gonadosomatic index (GSI) of experienced female Nile... 85

Fig. 23. Effect of synthetic tilapia GnIH (GnIH1 : 1 nM/㎖, GnIH-10 : 10 nM/㎖, GnIH-100 :... 87

Fig. 24. Effect of synthetic tilapia GnIH (GnIH1 : 1 nM/㎖, GnIH-10 : 10 nM/㎖, GnIH-100 :... 88

Fig. 25. Expression levels of GnIH (A) and GnRH1 (B) mRNA in the brain of Nile tilapia... 97

Fig. 26. Expression levels of GnIH (A) and GnRH1 (B) mRNA in the brain of Nile tilapia... 98

Fig. 27. E₂ and 11-KT level in plasma of female and male Nile tilapia reared at 22℃, 27℃... 100

Fig. 28. Regulation of GnIH expression by melatonin (modified from Tsutsui et al., 2007). 106

Fig. 29. Daily variation of melatonin 1c receptor (mel1c-r) (A) and GnIH (B) mRNA expression... 112

Fig. 30. Melatonin 1c receptor mRNA expression in tilapia brain after injection of 0.5 ㎎/㎏... 113

Fig. 31. GnIH (A) and GnRHI (B) mRNA expression in tilapia brain after injection of 0.5... 114

Fig. 32. FSH-β and LH-β mRNA expression in tilapia brain after injection of 0.5 ㎎/㎏ BW... 115

Fig. 33. Plasma levels of E₂ and 11-KT in male and female Nile tilapia injected with melatonin... 116

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