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표제지

목차

약어 9

I. 서론 10

II. 실험 12

1. 재료 12

1) 동물 12

2) 시료 12

3) 시약 13

4) 실험기기 14

2. 방법 14

1) Total polyphenol 함량 측정 14

2) Total flavonoid 함량 측정 15

3) DPPH radical 소거능 측정 15

4) ABTS radical 소거능 측정 15

5) HPLC를 이용한 성분분석 16

6) 군 분리 및 약물투여 16

7) 흰쥐의 MIA에 의한 골관절염 유발 17

8) 체중과 식이섭취량 측정 17

9) 혈청 내 anti-type II collagen antibody 측정 17

10) Western blot 분석 17

11) 조직병리학적 분석 18

12) 통계분석 19

III. 결과 20

1. Total polyphenol과 total flavonoid 함량 20

2. DPPH 및 ABTS radical 소거능 21

3. HPLC를 이용한 성분분석 22

4. 체중 및 식이섭취량 24

5. 혈청 내 anti-type II collagen antibody 측정 26

6. 관절 조직 내 항산화 단백질 분석 27

1) Nrf-2 27

2) HO-1 29

7. 관절 조직 내 염증 cytokine 및 매개 인자 분석 31

1) p-IκBα 31

2) NF-κB p65 33

3) COX-2 35

4) iNOS 37

5) TNF-α 39

6) IL-6 41

8. 조직병리학적 변화 관찰 43

1) H&E stain 43

2) Safranin-O stain 45

IV. 고찰 48

V. 결론 55

참고문헌 57

초록 67

Abstract 69

List of Tables

Table 1. The Composition of Jinmu-tang 13

Table 2. The Contents of Total Polyphenol and Flavonoid of... 20

Table 3. DPPH and ABTS Radical Scavenging Activity of JMT 21

Table 4. The Change of Body Weight and Food Intake 25

Table 5. The Serum Level of Anti-Type II Collagen Antibody 26

List of Figures

Fig.1. HPLC profiling of JMT 23

Fig.2. HPLC profiling of paeoniflorin 23

Fig.3. The effects of JMT on the Nrf-2 protein expression in... 28

Fig.4. The effects of JMT on the HO-1 protein expression in... 30

Fig.5. The effects of JMT on the p-IκBα protein expression in... 32

Fig.6. The effects of JMT on the NF-κB p65 protein... 34

Fig.7. The effects of JMT on the COX-2 protein expression in... 36

Fig.8. The effects of JMT on the iNOS protein expression in... 38

Fig.9. The effects of JMT on the TNF-α protein expression in... 40

Fig.10. The effects of JMT on the IL-6 protein expression in... 42

Fig.11. The histological analysis of the knee joint tissues after... 44

Fig.12. The histological analysis of the knee joint tissues after... 46

Fig.13. The histological analysis of the knee joint tissues after... 47

초록보기

 이 연구는 眞武湯 추출물(JMT)의 항산화능과 monosodium iodoacetate(MIA)로 유도된 골관절염 흰쥐 모델에 대한 JMT의 항산화 및 항염증 효과를 알아보기 위하여 시행되었다.

JMT의 항산화능을 알아보기 위하여 total polyphenol, total flavonoid와 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl(DPPH)과 2,2'-Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)(ABTS)의 radical 소거능을 측정하였다.

흰쥐에게 골관절염을 유발하지 않고 아무 처치를 하지 않은 정상군(N), 골관절염을 유발하고 아무 처치를 하지 않은 대조군(Con), 골관절염을 유발하고 indomethacin 5 ㎎/㎏을 투여한 양성 대조군(Indo), 골관절염을 유발하고 JMT 100 ㎎/㎏을 투여한 실험군(JMT100), 골관절염을 유발하고 JMT 200 ㎎/㎏을 투여한 실험군(JMT200)으로 나누어 4주간 실험하였다. 혈청 내 anti-type II collagen antibody, 관절 조직 내 nuclear respiratory factor 2(Nrf-2), heme oxygenase-1(HO-1), nuclear factor-kappa B p65(NF-κB p65), phosphorylated inhibitor of κBα(p-IκBα), cyclooxygenase-2(COX-2), inducible nitric oxide synthase(iNOS), tumor necrosis factor alpha(TNF-α), interleukin-6(IL-6)를 측정하였고, 병리조직학적으로 관찰하였다.

JMT에 함유된 total polyphenol과 total flavonoid를 측정한 결과, 각각 26.90 ± 0.33 ㎎/g과 6.02 ± 0.34 ㎎/g의 함량을 보였다. DPPH radical 소거능을 측정한 결과, L-ascorbic acid의 half maximal inhibitory concentration(IC50) 값은 1.35 ± 0.07 ㎍/㎖을 나타냈고, JMT는 52.95 ± 0.97 ㎍/㎖의 값을 나타냈다. ABTS radical 소거능을 측정한 결과, L-ascorbic acid의 IC50 값은 3.18 ± 0.02 ㎍/㎖을 나타냈으며 JMT는 91.49 ± 1.74 ㎍/㎖의 값을 나타냈다. 혈청 내 anti-type II collagen antibody의 수치는 모든 JMT 투여군이 대조군에 비하여 유의성 있는 감소를 나타냈다.

관절 조직 내 항산화 단백질 분석에서, Nrf-2는 대조군에 비하여 모든 JMT 투여군에서 유의성 있는 차이는 나타나지 않았지만, HO-1은 대조군에 비하여 JMT200에서 유의성 있는 증가를 보였다. 염증 cytokine 및 매개 인자 분석에서, NF-κB p65에서 모든 JMT 투여군은 대조군에 비하여 유의성 있는 감소는 없었지만, p-IκBα에서는 대조군에 비하여 JMT200이 유의성 있는 감소를 나타냈다. COX-2, iNOS에서 모든 JMT 투여군은 유의성 있는 감소가 나타났으며, TNF-α에서는 JMT200만 유의성 있는 감소가 나타났다. IL-6에서는 JMT 투여군에서 유의성 있는 차이는 없었다.

병리조직학적 변화 관찰에서, 대조군에 비하여 모든 JMT 투여군에서 활막과 연골 조직의 변화 및 proteoglycan의 파괴가 억제되었다.

따라서, 眞武湯은 항산화, 항염증의 효과로 산화적 스트레스 억제와 염증 cytokine과 매개인자의 발현을 억제하여 관절 조직을 보호하는 효능이 있어 골관절염의 진행을 억제시킬 것으로 사료된다.

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