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표제지

목차

Abstract 8

Ⅰ. 서론 10

Ⅱ. 연구내용 및 방법 12

1. 미규제 수인성 바이러스 (3종) 선정 12

가. E형 간염 바이러스 12

나. A형 간염 바이러스 12

다. 장내 아데노바이러스 13

2. 미규제 수인성 바이러스 실시간 PCR 검출법 마련 및 환경 적용성 평가 13

가. 문헌조사 및 후보 프라이머 선정 13

나. 특이적 및 비특이적 반응, 인위적 감염을 통한 검출민감도 평가 14

(가) 특이적 반응 및 검출민감도 14

(나) 비특이적 반응 및 음성대조군 14

(다) 인위적 감염 기반 검출민감도 14

다. 유효성검증(validation) 14

라. 환경시료 적용성 평가 14

Ⅲ. 연구결과 및 고찰 15

1. E형 간염 바이러스 15

가. Taq-Man Probe기반 실시간 PCR분석 15

(1) 문헌조사 및 후보 프라이머 선정 15

(2) 특이적 및 비특이적 반응, 인위적 스파이킹을 통한 검출민감도 평가 16

(3) 유효성검증 16

(4) 환경 적용성 평가 17

나. 사이버그린(SYBR Green)기반 실시간 PCR분석 18

(1) 문헌조사 및 후보 프라이머 선정 18

(가) 문헌조사 18

(나) 후보조합선별 18

(2) 특이적 및 비특이적 반응, 인위적 스파이킹을 통한 검출민감도 평가 19

(3) 유효성검증 21

(4) 환경 적용성 평가 21

2. A형 간염 바이러스 22

가. Taq-Man Probe기반 실시간 PCR분석 22

(1) 문헌조사 및 후보 프라이머 선정 22

(2) 특이적 및 비특이적 반응, 인위적 스파이킹을 통한 검출민감도 평가 23

(3) 유효성검증 23

(4) 환경 적용성 평가 24

나. 사이버그린(SYBR Green)기반 실시간 PCR분석 25

(1) 문헌조사 및 후보 프라이머 선정 25

(가) 문헌조사 25

(나) 후보조합선별 25

(2) 특이적 및 비특이적 반응, 검출민감도 평가 26

(3) 유효성검증 결과 27

(4) 환경 적용성 평가 27

3. 장내 아데노바이러스 28

가. Taq-Man Probe기반 실시간 PCR분석 28

(1) 문헌조사 및 후보 프라이머 선정 28

(2) 특이적 및 비특이적 반응, 검출민감도 평가 29

(3) 유효성검증 결과 30

(4) 환경 적용성 평가 31

나. 사이버그린(SYBR Green)기반 실시간 PCR분석 32

(1) 문헌조사 및 후보 프라이머 선정 32

(가) 문헌조사 32

(나) 후보조합선별 32

(2) 특이적 및 비특이적 반응, 인위적 스파이킹을 통한 검출민감도 평가 33

(3) 유효성검증 결과 35

(4) 환경 적용성 평가 36

Ⅳ. 결론 37

참고문헌 38

표목차

〈Table 1〉 Primer combinations selected by Taq-Man Probe method of Hepatitis E virus 15

〈Table 2〉 Detection sensitivity results of Taq-Man probe method for Hepatitis E virus 16

〈Table 3〉 Validation results of Taq-Man probe method for Hepatitis E virus 17

〈Table 4〉 List of primers selected by SYBR green method for Hepatitis E virus 18

〈Table 5〉 Selection of candidate combinations by SYBR green method for Hepatitis E virus 19

〈Table 6〉 Detection sensitivity of plasmid-based Hepatitis E virus using the SYBR green method 20

〈Table 7〉 Final detection sensitivity results of Hepatitis E virus using the SYBR green method 20

〈Table 8〉 Validation results of SYBR green method for Hepatitis E Virus 21

〈Table 9〉 Primer combinations selected by Taq-Man Probe method of Hepatitis A virus 22

〈Table 10〉 Detection sensitivity results of Taq-Man probe method for Hepatitis A virus 23

〈Table 11〉 Validation results of Taq-Man Probe method for Hepatitis A virus 24

〈Table 12〉 List of primers selected by SYBR green method for hepatitis A virus 25

〈Table 13〉 Selection of candidate combinations by SYBR green method for hepatitis A virus 25

〈Table 14〉 Detection sensitivity of artificial spiking based Hepatitis A virus using the SYBR green method 26

〈Table 15〉 Validation results of SYBR green method for Hepatitis A Virus 27

〈Table 16〉 List of presumed positive samples based on RT-PCR results for concentrated sample 27

〈Table 17〉 Primer combinations selected by Taq-Man Probe method of Adenovirus 28

〈Table 18〉 Detection sensitivity results of Taq-Man probe method for Adenovirus 29

〈Table 19〉 Detection sensitivity of artificial spiking based Adenovirus using Taq-Man probe method 30

〈Table 20〉 Validation results of Taq-Man Probe method for Adenovius 31

〈Table 21〉 List of primers selected by SYBR green method for Adenovirus 32

〈Table 22〉 Selection of candidate combinations by SYBR green method for Adenovirus 33

〈Table 23〉 Selection of candidate combinations by SYBR green method for Adenovirus 33

〈Table 24〉 Detection sensitivity of artificial spiking based Adenovirus using the SYBR green method 35

〈Table 25〉 List of presumed positive samples based on RT-PCR results for concentrated sample 36

그림목차

〈Figure 1〉 Structures of major waterborne viruses (cited from Altintas et al. 2015) 11

〈Figure 2〉 Detection of specificty and sensitivity of Hepatitis E virus by Taq-Man probe method 17

〈Figure 3〉 Detection of sensitivity of Hepatitis E virus based on artificial spiking by Taq-Man probe method 17

〈Figure 4〉 Analysis of concentrated sample 001-062 by RT-PCR using Taq-Man probe method of Hepatitis E virus 17

〈Figure 5〉 Analysis of concentrated sample 063-123 by RT-PCR using Taq-Man probe method of Hepatitis E virus 17

〈Figure 6〉 Detection of specificty and sensitivity of Hepatitis E virus by SYBR green method 20

〈Figure 7〉 Detection of sensitivity of Hepatitis E virus based on artificial spiking by SYBR green method 20

〈Figure 8〉 Analysis of concentrated sample 001-062 by RT-PCR using SYBR green method of Hepatitis E virus 21

〈Figure 9〉 Analysis of concentrated sample 063-123 by RT-PCR using SYBR green method of Hepatitis E virus 21

〈Figure 10〉 Detection of specificty and sensitivity of Hepatitis A virus by Taq-Man probe method 24

〈Figure 11〉 Detection of sensitivity of Hepatitis A virus based on artificial spiking by Taq-Man probe method 24

〈Figure 12〉 Analysis of concentrated sample 001-064 by RT-PCR using Taq-Man probe method of Hepatitis A virus 24

〈Figure 13〉 Analysis of concentrated sample 065-123 by RT-PCR using Taq-Man probe method of Hepatitis A virus 24

〈Figure 14〉 Detection of specificty and sensitivity of Hepatitis A virus by SYBR green method 27

〈Figure 15〉 Detection of sensitivity of Hepatitis A virus based on artificial spiking by SYBR green method 27

〈Figure 16〉 Analysis of concentrated samples by RT-PCR using SYBR green method of Hepatitis A virus 28

〈Figure 17〉 Melting curve analysis of concentrated samples using SYBR green method of Hepatitis A virus 28

〈Figure 18〉 Validation results of Taq-Man probe method for Adenovius 31

〈Figure 19〉 Analysis of concentrated sample 001-064 by RT-PCR using Taq-Man probe method of Adenovirus 31

〈Figure 20〉 Analysis of concentrated sample 065-123 by RT-PCR using Taq-Man probe method of Adenovirus 31

〈Figure 21〉 Validation results of SYBR green method for Adenovius 35

〈Figure 22〉 Melting curve analysis of concentrated samples of 001-092 using SYBR green method of Adenovirus 36

〈Figure 23〉 Melting curve analysis of concentrated samples of 093-123 using SYBR green method of Adenovirus 36

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